導語:
補料作為fedbatch的營養補充劑,一般由消耗量較大的成分組成,如氨基酸、維生素等,其組分濃度高,滲透壓高,在批次補料中至關重要,開發極具挑戰性,需要恰當的成分,適宜的濃度,所謂藝術難在平衡,在補料開發上亦是如此。目前市面上的商業化補料種類并不多,市場基本被業界的三巨頭(Gibco、Hyclone、Merck)壟斷,迫于進口產品居高不下的價格,以及未來對于持續性供貨的擔憂,國產化補料已經順勢崛起。
01
補料的重要性
那補料到底有多重要,小編先貼組數據,選擇一款頂尖的商業基礎培養基進行batch培養,同時使用商業化補料進行fedbatch作為對照組,試驗細胞為表達某雙抗的CHO-K1單克隆細胞株。
沒有什么比數據更有說服力的了。Batch培養的細胞也有生長對數期、平臺期和凋亡期,但凋亡期活率下降很快,12天活率僅剩82.4%,表達量是1.24g/L,再看對照組,第11天的表達量達到4.52g/L,第14天活率還有88%。可見補料在細胞培養及蛋白表達上的重要性。接下來小編又換了一個基礎培養基(皓陽培養基),進行了相同的實驗。
很明顯,換了基礎培養基后,補料仍舊不可或缺,但是這次使用皓陽基礎培養基后,細胞生長的狀態稍有改善,第11天的表達量有2.91g/L,能達到對照組的61%,只是從11天開始表達量原地不動,細胞只存活,不表達,也實在是無米可用。兩個小實驗對比可以發現,同樣是基礎培養基batch培養,生長及表達差距甚遠,可能是基礎中不同的組分及濃度造成了這個差異,到底是哪些成分的濃度差異導致,由于商業基礎培養基的成分不明確,這里只能是一個迷。
02
補料的搭配組合
一般補料為一個主體補料搭配一個堿性補料,堿性補料成分比較清晰,為幾個難溶性氨基酸,如酪氨酸等。小編用僅含氨基酸、維生素和幾個鹽的補料(皓陽補料),以皓陽培養基為基礎,與上述商業化補料進行了比對研究。
使用皓陽基礎培養基僅補料商業補料,不補堿性補料,最后表達量為2.65g/L,與batch試驗中的結果相當甚至更低,前期細胞生長與活率維持與另兩組相似,后期維持很差,結束時活率甚至低于batch水平,表達量結果與batch相似,第11天后就停止表達,猜測是商業化補料中完全不含堿性補料中的某個或某幾個氨基酸,導致